如果加入明胶的目的就是为了让细胞贴壁生长的话，完全没有必要花费这些多时间和费用来做，到市场到买回来几块TC处理过的细胞培养板就可以了！COSMO品牌现在已在北京合资了，价格下降很多！现在特价一块只要8.00元

　　明胶溶液可配成2％浓度，加热至40－50℃，过滤除菌。包被培养瓶时4℃过夜即可。我们用Sigma的明胶，感觉很好，也不贵！！我们把2％的明胶用去离子谁稀释到1％，并通过0.22um的滤器过滤用于细胞培养！

　　我们包被培养瓶是在细胞培养箱中孵育至少1hr，我们做的很好，你可以试一试！！养内皮细胞，0.1%的明胶如何配？如何消毒？怎样铺？急0.1％明胶：称取明胶，用三蒸水配成0.2％(W/V)溶液，37℃水浴溶解，过滤，放4℃备用。(即用过滤法消毒)附文章:人脐带静脉内皮细胞的分离培养与增殖试验 撰稿刘金

　　一般用0.1%明胶包被30min以上即可以使用，一般根据细胞瓶的大小加入适量的明胶，然后放置于37度培养箱中30min以上即可使用，使用之前将多余明胶弃去忘了说一句，用前要放在显微镜下观察一下，看看有无颗粒及异常物质

　　请问各位师兄师姐，培养瓶包被明胶浓度一般是多少？包被后需要干燥吗？干燥的过程中容易污染吗？包被后是放在4度冰箱中过夜还是放在培养箱中过夜？明胶的分子量大，且在摄氏37度以下发生凝胶化，当然过滤不动了。应该高压灭菌。我用明胶包被的培养瓶，用的时候发现里面有好多小点点，有的亮有的黑。我不知是污染，还是明胶的颗粒？你们有没遇见这情况？

　　明胶溶液配好了以后，不能高压！因为高压后，明胶变性。可以配成0.1%-0.2%,溶解后0.22um滤膜抽滤。不过要多准备几个滤器，因为比较难抽。使用时，加上明胶，覆盖培养平面即可。置于培养室中1-24h，取出，弃去液体，用培养基洗一遍即可。

　　明胶溶液可以高压(不怕变性，有可溶的和不可溶的，可用sigma的，不贵。另外，二者均可高压后使用，我都试过)，用PBS配。浓度在0.5-2%均可。将3-5ml明胶PBS放在培养瓶中，培养箱中包被1h以上，能过夜是最好的。用前取出，吸弃明胶，加入1-2ml培养液(10%血清即可)冲洗，稍微吹干即可使用，培养效果甚佳。

　　抱歉，这是我师兄做了3年实验和我养3年细胞的经验，书上并无详细说明。具体原理可以参考《细胞实验指南》(冷泉港实验室)，明胶的主要成分是I型胶原，铺胶包被后，可以促进细胞增殖、迁移，而且价格便宜，因而用于包被很是适宜。理论上说，用水配也没有什么大不了的，但是最后一定要用培养液洗一下(有的文献认为血清中的蛋白可以中和一下的)。我习惯用PBS配，实验条件固定了，就没有去改过了。包被的培养瓶不需要干燥那么久，如果是塑料培养瓶只需稍微干燥(通常我就在超净台中，吹5－10分钟而已)，玻璃类的30min就可以了，其实个人认为，干燥并非非常重要，而主要开云 开云体育官网在于包被，务必放在温箱中。另外，还取决于细胞种类，我以前养的是内皮，娇气一些。如果是肿瘤细胞养在玻璃片上，都不需要吹干，包被后洗完就用即可使用。我觉得我回答得很清楚了，就不给你发邮件了如果这样，

　　那你就包被过夜，吹干半小时到一小时吧，瓶子用塑料瓶。原代接种后，让细胞多贴几天(3天)，绝对静止不动，血清给点好的胎牛，相信一定能贴得很牢固的。另外，你制备原代细胞时，尽量不要对细胞损伤太厉害，比如挑个好点的离心机，离心转速不要太高，适当可以采用低温或者4度，尽快接种到培养瓶中等等。祝你成功！

　　接种细胞前是否要用培养基预培养一下包被的培养瓶？我是这样做的:200mg明胶溶于100mlPBS中即成0.2%明胶溶液,60度水浴过夜,次日过滤,4度放置不会发生析出,可用于包被培养瓶.细胞贴壁很好.建议楼主也试用一下.

　　答：不需要做任何检测，残留在瓶壁上的明胶就已经足够了。可以用PBS冲洗一遍后，再用含血清(10%)的培养液1ml冲洗一遍。

　　你说那些颗粒是明胶颗粒，没有关系的。最好还是按上述步骤冲洗一下。粗制的明胶中会混杂有不少细微的杂质，我认为你在显微镜下所观察到的颗粒也有可能就是这些物质。我们实验室在高压消毒前通常会将配好的明胶溶液先行滤过一下。并且，明胶铺板后室温放置30分钟后即可将多余的吸弃，不必放入培养箱里过夜。明胶在室温下的确难溶，可以将其置于50-60度水浴中助溶，随后立即正压过滤。明胶包被好后如果不马上使用,可以盖紧瓶口放入无菌饭盒内4度冰箱短期存放，用时PBS冲洗一下。还有，如果zbch 是在培养ESc，我建议你将明胶浓度该为２％。０．１％的明胶由于浓度低，对克隆的支持力较差，不能形成较大的克隆，并且ESc也容易发生分化。

　　用0.5M的乙酸配制成1mg/ml的储存液保存于-20度，用时用双蒸水或PBS

　　（1）先配制0.5M乙酸（用双蒸水配制，如600mg冰醋酸可配制20ml），0.22um滤膜过滤除菌

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　　（2）打开包装加入一定量的0.5M乙酸（如有5mg粉剂则加入5ml），封好后置于4度约1-2h即可溶解

　　（2）一个培养皿涂布均匀后吸出至下一个培养皿（可尽可能减少使用体积，涂布一薄层即可），涂布完毕后置于37度培养箱中约1-2h以晾干（可置于消毒的饭盒中稍敞开一点培养皿盖）

　　当然具体的使用量可根据你的需要来定，并可事先分装保存好装过明胶的玻璃瓶如何清洗。本人养细胞用过的装明胶(1%gelatin)的玻璃瓶无论是用水冲,还用胰酶洗,又用开水煮30分,都冲洗不掉内壁上面的明胶,请教一下各位学长,非常感谢!!

　　3、把剪碎的尾键置于150ml，0.1％消过毒的醋酸中，4℃放置，并不时振荡；

　　有时可继续向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重复以上步骤，以制备更多的鼠尾胶。

　　0.1%的醋酸（冰醋酸）应是g/L,和0.9%盐水所指的一样，查过冰醋酸的密度是1.04,分析纯的冰醋酸的浓度应大于99.5%,因此配制时基本可以用1ml溶于1L双蒸水中得到0.1%的醋酸。置于盐水瓶中10磅10～15分钟即可，消毒时（包括其它液体消毒），觉得在瓶口与胶塞中放一根棉绳，消毒完后（必须基本冷却后再打开压力锅，否则胶塞会炸出）扯出棉绳，这种方法最好

　　由于胶原液不能过滤也不能高压灭菌，所心制取胶原过程当中注意无菌操作，在使用时待凝胶后。放在紫外线下照射过夜，第二天便可使用。

　　在园里搜索了一下关于明胶在细胞培养中的使用问题,还是有很多问题大家没有详细和标准的说明,现在有几个具体问题,请教各位战友,

　　1、明胶溶液配置的问题:用无菌PBS配还是用去离子水配?我们实验室有国产的明胶,很大一瓶的那种,能不能用于细胞培养?难道一定要用GIBCO 20ML即用型的?

　　2、明胶使用浓度的问题:有说0.1%,1%和2%的,我养的是内皮细胞,应该用哪种浓度呢?

　　3、明胶消毒的问题:有人说可以高温高压灭菌,有人说应该要过滤...还有人说要先高压再乘热过滤?不会吧,到底要怎样?晕啊~~~

　　4、明胶包被培养瓶的问题:有人说包被后置培养箱过夜,用时在弃溶掉的,加PBS和培养液冲洗..也有人说包被后吹干30min-60min .再加培养液冲洗即可用,到底怎么个做法啊

　　5、明胶包被后的培养瓶使用期的问题:包被后的培养瓶能够用多久呢?有文献说包被7天,干2-3天后放4度保存可以在两周内使用

　　以上是我的不解啊,望各位大侠指点!!! 1％明胶PBS高压消毒后置于4度冰箱，未见呈胶冻状，请问是否正常？谢谢本人是新手，最近要做胎鼠神经元培养，因为实验室有明胶没PLL，所以想问一下能不能代替，因为大多数文献上都是用PLL（多聚赖氨酸）。

　　还记得你在读研时，所在学校的补助是多少吗~？读博的也可以说说呀。我的好少，有点想哭。

　　小伙伴们，请问你们的女（男）朋友是怎么找到的？（好给后来的朋友参考啊）是交友网站，还是七大姑八大姨介绍，还是同学自然成事？开云 开云体育官网春天到了，我也想拥有一段甜甜的恋爱~看看你们可怜又可爱的小师弟小师妹吧！

　　悬浮细胞复苏后培养2.3天会出现小黑点，在倒置显微镜第四挡可见细菌在活动。采用两次离心，然后加平时双倍量的抗生素，效果不佳。实验用的东西都重新高压灭菌了，培养液也重新过滤了，个人操作也更加注意了，但仍然在复苏后出现细菌，苦恼！！！

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