开云 开云体育平台明胶海绵及其制备方法及储存方法与流程

2024-04-22 17:08:38

  1.一种支持肿瘤组织/或细胞三维生长的明胶海绵的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括:

  添加氰酸至等体积混合的甲醇和水的混合物中制得混合溶液1,混合溶液1中氰酸的质量分数为2-5%;

  混合牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白和混合溶液1经孔泵送同质化,制备明胶混合物;以及

  3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤s1中胶原蛋白原材料前处理包括:

  剔除牛深层屈肌腱中的筋膜、脂肪、肌肉表面非胶原蛋白和其他无关物质,自来水清洗后,冷冻,于切片机上沿着垂直于牛深层屈肌腱的纵轴切成厚度为0.4-1㎜的片块。

  5.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述步骤s2:胶原蛋白原材料酶解包括:

  按照0.5-2mg/g配比将无花果蛋白酶溶解于ph为7.0-8.0、浓度为0.02-0.5mol/l磷酸盐缓冲液中形成酶解液1;将经步骤s1处理的牛深层屈肌腱的片块置入酶解液1中,于35-38°c下搅拌,搅拌时间1-3小时;经蒸馏水清洗0.5-2小时,制得牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白;其中,每g牛深层屈肌腱的的片块添加0.5-2mg的无花果蛋白酶。

  6.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于:按照0.8mg/g将无花果蛋白酶溶解于ph为7.0的0.5mol/l磷酸盐缓冲液中形成酶解液2;将经步骤s1制得牛深层屈肌腱的片块置入酶解液2中;于37℃下搅拌2小时;经蒸馏水清洗1小时,制得牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白;其中,每g牛深层屈肌腱的的片块添加0.8mg的无花果蛋白酶。

  7.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤s3:胶原蛋白盐析纯化包括:

  将牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白于1-5%中性盐溶液中连续提取两次,每次1-2小时,提纯牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白。

  8.如权利要求7所述的制备方法,其特征在于,将牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白于3%中性盐溶液中连续提纯2次,每次2小时,提纯牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白。

  9.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤s4:同质化胶原蛋白包括:

  将步骤s3中提纯的牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白加入所述混合溶液1中;在40℃下,搅拌0.5-2小时,经孔泵送同质化。

  10.如权利要求9所述的制备方法,开云APP 开云官网入口其特征在于,添加氰酸至等体积混合的甲醇和水的混合液中制得所述混合溶液2,混合溶液2中氰酸的质量分数为2.5%;将步骤s3中提纯的牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白加入所述混合溶液2中;在40℃下,搅拌1.5小时,经孔泵送同质化。

  11.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法还包括:所述海绵与所述明胶混合物黏附之前,所述海绵经丙酮、乙醇溶液中清洗处理,经无菌蒸馏水中洗涤处理。

  12.如权利要求11所述的制备方法,其特征在于,切割海绵成厚度为1㎜、宽度为5㎜、长度为8㎜的海绵薄片;蒸馏水中煮海绵薄片,Kaiyun 开云开云APP 开云官网入口重复三次,每次0.5小时;取出海绵薄片依次经丙酮中清洗处理0.5-1.5小时,乙醇中清洗处理0.5-1.5小时;再取出海绵薄片于沸腾的三蒸水的洗涤0.25-0.5小时,重复三次。

  13.如权利要求12所述的制备方法,Kaiyun 开云其特征在于,海绵薄片在丙酮中清洗处理1小时。

  14.如权利要求12所述的制备方法,其特征在于,海绵薄片在乙醇中清洗处理0.5小时。

  15.如权利要求12所述的制备方法,其特征在于,海绵薄片在沸腾的三蒸水的洗涤0.5小时,重复三次。

  17.一种支持肿瘤组织/或细胞三维生长的明胶海绵的制备方法,其特征在于,通过明胶混合物包被海绵薄片制得所述明胶海绵,所述制备方法包括:

  步骤s10:制备明胶混合物,所述明胶混合物包括质量分数1-2%牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白、质量分数2-5%氰酸、50-70v/v%甲醇和30-50v/v%三蒸水;

  步骤s30:36-40℃过夜干燥添加所述明胶混合物后的海绵薄片,所述牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白凝聚、沉积并黏附在海绵薄片上,制得所述明胶海绵。Kaiyun 开云

  18.如权利要求17所述的制备方法,其特征在于,所述步骤s10中,所述明胶混合物包括:质量分数2%牛深层屈肌腱纤维胶原蛋白、质量分数2.5%的氰酸、60v/v%甲醇和33v/v%三蒸水。

  19.如权利要求17所述的制备方法,其特征在于,所述步骤s30中,36℃过夜干燥添加所述明胶混合物后的海绵薄片,开云APP 开云官网入口所述牛屈肌腱纤维胶原蛋白凝聚、沉积并黏附在海绵薄片上,制得所述明胶海绵。

  20.一种支持肿瘤组织/或细胞三维生长的明胶海绵,其特征在于,所述明胶海绵由权利要求1-19中任一项所述的制备方法制得。

  21.一种支持肿瘤组织/或细胞三维生长的明胶海绵的储存方法,其特征在于:所述储存方法包括:

  步骤s11:于ph为6.8-7.4的hanks平衡盐溶液中洗涤明胶海绵,洗涤时间1小时;

  步骤s22:温度4℃,储存步骤s11中洗涤后的明胶海绵在的ph为6.8-7.4的新鲜hanks平衡盐溶液中,直至明胶海绵被使用;

  步骤s11中,于ph为7.4的hanks平衡盐溶液中洗涤明胶海绵,洗涤时间1小时;

  步骤s22:温度4℃,储存步骤s11中洗涤后的明胶海绵在的ph为7.4的新鲜hanks平衡盐溶液中,直至明胶海绵被使用。





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